This site uses cookies.
Some of these cookies are essential to the operation of the site,
while others help to improve your experience by providing insights into how the site is being used.
For more information, please see the ProZ.com privacy policy.
Freelance translator and/or interpreter, Verified site user
Data security
This person has a SecurePRO™ card. Because this person is not a ProZ.com Plus subscriber, to view his or her SecurePRO™ card you must be a ProZ.com Business member or Plus subscriber.
Affiliations
This person is not affiliated with any business or Blue Board record at ProZ.com.
Source text - English 3. METHODS
3.1 Principle
The Salmonella typhimurium histidine (his) reversion system is a microbial assay which measures his" - hj§ reversion induced by chemicals which cause base changes or frameshift mutations in the genome of this organism.
A trace of histidine in the top agar allows the logarithmic division of the histidine-requiring bacteria in the presence of the test-compound and any of its metabolites generated by the S9 mix. This period of several generations of auxotrophic cell division is essential for the fixation of pro-mutagenic lesions in the DNA, and results in the formation of a lawn of histidine-requiring bacteria whose further division is prevented by exhaustion of histidine. Only that small fraction of bacteria which have reverted to histidine-independence (either spontaneously or by the action of the test chemical) will continue to divide to form discrete, randomly distributed visible colonies each one of which consists of the progeny of a single mutant bacterium. The assay determines whether addition of graded doses of the test substance to a series of such plates induces a dose-related increase in mutant colonies compared with plates treated only with the appropriate volume of solvent.
Two independent experiments were carried out each with and without metabolic activa-tion, each consisting of 3 plates/concentration.
3.2 Tester strains
The following Salmonella typhimurium strains were used in this study - obtained from Dr. Bruce N. AMES: ТА 1537. ТА 1538 and ТА 98 which primarily respond to frameshift mutagens and ТА 1535 and ТА 100 which respond to base-pair substitution mutagens. In addition to the mutation in the histidine operon these strains contain several other mutations that greatly increase their ability to detect mutagens. The genotypes are shown in the following table.
The growth requirements and the genetic identity of the strains, their sensitivity to UV-radiation and crystal violet and their resistance to ampicillin are regulary checked (see section 35.). The strains used yield spontaneous revertants within the frequency ranges expected.
For the mutagenicity experiments frozen permanent copies of the tester strains were used.
Translation - Russian 3. МЕТОДЫ
3.1 Принцип
Гистидин (his) реверсионная система Salmonella typhimurium это микробная проба, определяющая his- → his реверс-мутацию индуцированную химикатами, которые вызывают замену оснований или мутации со сдвигом рамки считывания в геноме данного организма.
След гистидина на главном агаре обеспечивает логарифмическое деление гистидин-зависимых бактерий в присутствии тестируемого состава и любого его метаболита, генерируемого смесью S9. Этот период деления нескольких поколений ауксотрофных клеток, очень важен для фиксации про-мутагенных повреждений в ДНК, он оканчивается формированием газона гистидин-зависимых бактерий, чье дальнейшее деление становится невозможным, вследствие израсходования гистидина. Только определенное, небольшое количество бактерий, реверс-мутация у которых привела к гистидин-независимости (либо спонтанно, либо под действием тестируемого химиката) будет продолжать делиться, до формирования отдельных, случайно распространенных, видимых колоний, каждая из которых состоит из потомства одной мутантной бактерий. Проба определяет, вызывает ли добавление возрастающих доз тестируемого вещества к серии таких чашек, дозозависимое увеличение мутантных колоний по сравнению с чашками, в которые добавлен исключительно растворитель в соответствующих объемах.
Проведено два независимых эксперимента, как с системой метаболической активации так и без нее, каждый из которых состоял из 3х чашек/ концентраций.
3.2 Тест штаммы
В исследовании использовали следующие штаммы Salmonella typhimurium – полученные от доктора Брюса Н. Эймса: ТА 1537. ТА 1538 и ТА 98 которые первично реагировали на мутагены, вызывающие мутации со сдвигом рамки и ТА 1535 и ТА 100 которые реагировали на мутагены вызывающие замену пар оснований. В добавок к мутации в гистидин опероне, данные штаммы содержат несколько других мутаций значительно увеличивающих их способность к определению мутагенов. Генотипы показаны в следующей таблице.
Условия, необходимые для роста, генетическая принадлежность штаммов, чувствительность к УФ – облучению, кристаллвиолету и их устойчивость к ампицилинну постоянно проверяли (см. раздел 35.). Использованные штаммы спонтанно производили ревертантов в пределах ожидаемых частотных диапазонов.
Для исследования мутагенности использовались замороженные перманентные копии тестовых штаммов.